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革蘭氏染色配制及染色方法實(shí)驗(yàn)步驟
閱讀次數(shù)：405 發(fā)布時(shí)間：2024/7/18 10:28:34
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 　　實(shí)驗(yàn)方法原理：本染色法是基本的染色法，可使用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細(xì)菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性兩類。
　　
　　實(shí)驗(yàn)步驟
　　
　　一、實(shí)驗(yàn)試劑：
　　
　　1. 結(jié)晶紫溶液：
　　
　　A液：結(jié)晶紫：2g，95%乙醇：20ml。
　　
　　B液：草酸銨：0.8g，蒸餾水：80ml。
　　
　　需在用24小時(shí)將A液. B液混合，過濾后裝入試劑瓶內(nèi)備用。
　　
　　2. 碘液：
　　
　　碘：1g，碘化鉀：2g蒸餾水：300ml。
　　
　　出碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼  續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解，后補(bǔ)足水量。
　　
　　也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
　　
　　3. 脫色液：95%乙醇。
　　
　　4. 復(fù)染液：
　　
　　A.貯存液：沙黃：2.5g，95％乙醇：100ml。
　　
　　B.應(yīng)用被：A液：10ml，蒸餾水：90ml。
　　
　　菌片制備：染色的步是制作涂片。菌液涂片時(shí)，用接種環(huán)蘸取菌液點(diǎn)在載玻片上，標(biāo)本可直接在玻片上涂布，菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水1滴，置玻片上，用接種針挑去菌落，在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動(dòng)作會(huì)改變菌細(xì)胞原有的排列形式，或造成細(xì)菌鞭毛脫落，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不易過高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色。
　　
　　二、染色方法：
　　
　　l. 涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染1min，清水沖去染液。
　　
　　2. 加碘液染1min，水洗。
　　
　　3. 加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約30，至無紫色脫落為止，水洗。
　　
　　4. 加復(fù)雜液，染30，水洗。
　　
　　5. 干后鏡檢。
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