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一、酶消化法

1、胰酶。這是用得*多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。

0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。

2、膠原酶。這種方法比較少，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下細(xì)胞。這種方法作用溫和，對細(xì)胞損傷較小，但是，價格也較貴。中止同樣是用血清。

二、離子螯合劑

不破壞細(xì)胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測細(xì)胞表面分子的話，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。

1、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì)，對細(xì)胞間也有一定作用。注意，它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶。因此，配制時應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此，消化下來的細(xì)胞要洗一遍。

2、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細(xì)胞的損傷比較大，但是分離成單細(xì)胞懸液的能力確實(shí)比較強(qiáng)。

三、物理法

直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來。

四、冷凍法

此方法僅能用于細(xì)胞傳代時。無法使組織上的細(xì)胞脫落下來。本方法的原理，我想是因細(xì)胞冷凍后收縮，從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點(diǎn)是：對細(xì)胞損傷小，不需要中止或洗細(xì)胞，方便，不需要另外配制消化液。

特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細(xì)胞。不足是細(xì)胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡操作的間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的培養(yǎng)，效果非常滿意。

具體過程是：

1、用較多的4度的PBS洗滌一遍細(xì)胞(以6孔板為例，加1.5ml/孔)，

2、再加0.5ml 4度的PBS，靜置操作臺上，很快細(xì)胞就小片脫落，

3、輕輕吹打，細(xì)胞即完全脫落，

4、按一定比例傳代。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司