遠(yuǎn)慕生物：ACK紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)一、ACK紅細(xì)胞裂解液簡(jiǎn)介：
去除紅細(xì)胞的方法有多種，上海遠(yuǎn)慕生物的ACK紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱(chēng)為ACK Lysis Buffer，是一種從人、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無(wú)核紅細(xì)胞的
溶液，其主要有效成分為氯化銨，ACK Lysis Buffer經(jīng)過(guò)優(yōu)化配方，在裂解無(wú)核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。
遠(yuǎn)慕生物 ACK Lysis Buffer對(duì)于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞，例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細(xì)胞，效果不佳，裂解類(lèi)似細(xì)胞時(shí)，不建議采用。本裂解液經(jīng)過(guò)濾除菌，經(jīng)過(guò)ACK Lysis Buffer處理過(guò)的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的
細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或
蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。
二、ACK紅細(xì)胞裂解液組成：
ACK Lysis Buffer 100ml 500ml 4℃ 密閉
使用說(shuō)明書(shū)
1份
主要成分：主要由NH4Cl組成，pH7.2。
三、自備材料：
1、 胰蛋白酶，亦可采購(gòu)遠(yuǎn)慕的胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)(CC0130) 2、
離心機(jī)3、 PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液
四、ACK紅細(xì)胞裂解液操作步驟（僅供參考）：
（一）組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作
1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過(guò)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解: 加入3～5倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心: 4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無(wú)低溫離心機(jī)本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。 6、如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
（二）組織細(xì)胞樣本的快速操作(無(wú)需洗滌)
1、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)過(guò)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過(guò)適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、 加入15～20ml的 PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。 4、 離心：4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清，本步驟亦可在室溫下操作。 5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次。 6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
（三）血液樣本的常規(guī)操作
1、取新鮮抗凝血，400～500g離心5min，離心棄上清。
2、 裂解: 加入6～10倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1～5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解1～2min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4～5min，并且裂解過(guò)程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解）
3、離心: 4℃，400～500g離心5min，棄紅色上清。如無(wú)低溫離心機(jī)本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌: 根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g離心2～3min，棄上清，離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。 6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意： 對(duì)于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進(jìn)行第2步操作，并在4℃或室溫裂解4～15min。對(duì)于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠；對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10min，但通常不宜超過(guò)15min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
（四）血液樣本的快速操作(無(wú)需洗滌)
1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的ACK Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解4～15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10min，但通常不宜超過(guò)15min，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
2、加入20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。 3、400～500g離心5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。 4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。 5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
五、注意事項(xiàng)：
1、制備細(xì)胞懸液是應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。
2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。 3、離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。
4、對(duì)于常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過(guò)程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過(guò)程，洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。
5、離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。
6、如果經(jīng)過(guò)ACK Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用DEPC處理的溶液，即無(wú)需在該操作中特意去除RNase。 7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
六、有效期： 6個(gè)月有效。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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