真菌的DNA和RNA提取方法_技術(shù)文章_上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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真菌的DNA和RNA提取方法
閱讀次數(shù)：648 發(fā)布時(shí)間：2016/7/7 11:45:30

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    真菌的DNA和RNA提取方法

    搞真菌基因功能研究的不可避免的總要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有較多的多糖成分影響到所提DNA和RNA的質(zhì)量和后續(xù)的分析。因此一個(gè)高質(zhì)量的、實(shí)惠的提取方法是我們的優(yōu)先選擇，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家參考。

    真菌DNA的提�。ǚ椒ㄒ唬�

    1.取真菌菌絲0.5g,在液氮中迅速研磨成粉

    2.加入4mL提取液，快速振蕩混勻

    3.加入等體積的4mL的:異戊醇（24:1），渦旋3～5min（此處是粗提沒(méi)有加酚，可以節(jié)約成本的喲！）

    4.1000rpm，4℃，5min

    5.上清用體積的:異戊醇（24:1）再抽提一次（10,000rpm，4℃離心5min）

    6.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇或2.5倍體積的無(wú)水乙醇沉淀,混勻,靜置約30min

    7.用毛細(xì)玻棒挑出絮狀沉淀,用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次,再用無(wú)水乙醇漂洗1次,吹干，重懸于500ulTE中

    8.加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃處理1hr

    9.用酚（pH8.0）::異戊醇（25:24:1）和:異戊醇（24:1）各抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）

    10.取上清，1/10V3MNaAc,2.5V體積的無(wú)水乙醇,-70℃沉淀30min以上

    11.沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干,溶于200ulTE中，-20℃保存?zhèn)溆?br />
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