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　　在ELISA實驗過程中，樣本稀釋是一個重要的步驟，為何樣本都需要稀釋呢？/天就先向大家著重介紹一下血清樣本稀釋的原因以及稀釋的方法。

　　一、稀釋血清的原因：

1、比賽按捺對比明顯，應稀釋比賽物。

2、以下降非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現(xiàn)出來。

血清稀釋用一般的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，血清的稀釋倍數(shù)一定要事確認，但也不必一點點，做一個預實驗即可，挑選OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即ELISA中陰性孔OD在1.0，這么做出來的曲線對比會比較靈敏。

二、稀釋血清的方法：

1、先把蛋白稀釋一定的倍數(shù)，比如說10倍、20倍稀釋（這樣可以大體確認一個參數(shù)），將抗原進行一系列稀釋包被反應等等。

2、再用一定稀釋度的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷，再加酶結合物進行反應，經(jīng)孵育洗刷后，加底物溶液顯色，停止反應后分別測定O.D值，挑選O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為適包被濃度。一般總是要挑選那個O.D值稍大于1.0，而不挑選小于1.0的抗原濃度。陰性參閱血清O.D值要求<0.1-0.2。就是要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的O.D值有明顯差別。

以上就是ELISA實驗中稀釋血清樣本的原因及方法，大家在實驗過程中一定要多多注意，否則可能會影響實驗的終結果。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司