詳細(xì)內(nèi)容

　　細(xì)胞名稱：牛腎細(xì)胞；MDBK

組織來源：腎細(xì)胞

培養(yǎng)條件：RPMI1640(W/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

形態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞

細(xì)胞來源：1957年２月18日，S.H.Madin和N.B.Darby從一只表觀正常的成年牛腎臟建立了MDBK細(xì)胞株。1973年這株MDBK細(xì)胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染。1982年發(fā)現(xiàn)了一株未被BVDV感染的MDBK細(xì)胞株。這株細(xì)胞初來自ATCC1967年７月第96代的凍存管。這株MDBK細(xì)胞的后代經(jīng)NVSL檢測，未發(fā)現(xiàn)被任何病毒污染的證據(jù)。1982年８月，R.A.VanDeusen將其提供給ATCC時(shí)，已傳代至第110代。這株細(xì)胞未被BVDV感染。

產(chǎn)品用途：提供用于科研的穩(wěn)定細(xì)胞系。

儲(chǔ)存方式：凍存的細(xì)胞干冰運(yùn)輸，復(fù)蘇的細(xì)胞冰袋運(yùn)輸。

MDBK牛腎細(xì)胞 培養(yǎng)條件：

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640培養(yǎng)基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗+800ng/ml Taxol

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣 95%，CO2 5%

MDBK牛腎細(xì)胞  培養(yǎng)方法：

收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已長滿（達(dá)80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：

a，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。

b，向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

c，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

d，傳代比例：1:2-1:3

溫馨提示：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是加入高藥物濃度的，為800ng/ml。我們采取緩慢增加藥物的梯度的方法。具體步驟是，先加含200ng/mlTaxol藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間會(huì)有小部分細(xì)胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液可以去掉，等細(xì)胞待長滿就可以消化傳代了，這時(shí)可以一直用含藥物培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細(xì)胞，一兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml，兩代后可以將藥物濃度提高至高水平800ng/ml，含藥物培養(yǎng)液用于細(xì)胞培養(yǎng)都沒有問題，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里加藥物了。

MDBK牛腎細(xì)胞 保存和應(yīng)用：

客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

標(biāo)簽：MDCK犬腎細(xì)胞   

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