微生物室常用的病原真菌檢查方法_新聞中心

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微生物室常用的病原真菌檢查方法
閱讀次數(shù)：585 發(fā)布時間：2021/9/1 11:32:32

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　　1、真菌鏡檢

是jian單也是很有價值的實驗室診斷方法。其優(yōu)點在于簡便、快速，無菌部位的陽性結(jié)果可直接確定真菌感染。但是由于陽性率較低，陰性結(jié)果亦不能排除診斷。直接鏡檢對于淺表和皮下真菌感染有幫助。在皮膚刮屑、毛發(fā)或甲標本中發(fā)現(xiàn)皮膚癬菌、念珠菌和馬拉色菌的成分可提供對相應(yīng)真菌病的可靠診斷。如在無菌體液的直接鏡檢中發(fā)現(xiàn)真菌成分常可確立深部真菌病的診斷，例如在腦脊液中檢測到帶莢膜的新生隱球菌酵母細胞，或外周血涂片中檢測到莢膜組織胞漿菌細胞。但一般在有菌部位則只有發(fā)現(xiàn)大量真菌菌絲方才有意義，通過直接鏡檢一般可以區(qū)分念珠菌、隱球菌、暗色真菌、毛霉（接合菌）等菌的感染，進一步明確鑒定菌種需要通過培養(yǎng)鑒定來完成。

2、真菌培養(yǎng)

真菌培養(yǎng)是實驗室檢查中的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)出致病真菌是進一步鑒定菌種的提條件。真菌培養(yǎng)步是從臨床標本中培養(yǎng)真菌的初代培養(yǎng)，初代培養(yǎng)后進一步進行分離純化培養(yǎng)和鑒定培養(yǎng)。不同致病真菌每一步所采用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)時間和培養(yǎng)溫度存在一定的差異。常規(guī)的真菌培養(yǎng)需要在28-30°C溫度下培養(yǎng)3-4 周，一般初代培養(yǎng)選用沙氏培養(yǎng)基（SDA）或者馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA），采用試管培養(yǎng)，一般同時培養(yǎng)兩管，其中一管可添加抗生素（氯霉素或慶大霉素均可）。在培養(yǎng)1周內(nèi)，應(yīng)該每天觀察有無真菌生長。一般培養(yǎng)4周后，如果無真菌生長可報陰性。發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)出真菌，直接挑取少量菌體或者小培養(yǎng)后，用乳酸酚棉蘭制成涂片顯微鏡下觀察，結(jié)合菌落大體形態(tài)，典型菌種可直接報告種屬。不典型菌種根據(jù)基本表現(xiàn)，采用適當?shù)臉藴疏b定培養(yǎng)基，標準培養(yǎng)條件培養(yǎng)，必要時要結(jié)合生理學和分子生物學方法進行鑒定。

3、真菌鑒定

對常見致病真菌要掌握的鑒定原則是先區(qū)分酵母菌和霉菌。

如果初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)出酵母樣菌落，在鑒定應(yīng)進行分離純化。在去除細菌和其他真菌污染，區(qū)分混合感染后，對純菌落進行鑒定。酵母菌鑒定主要根據(jù)形態(tài)學特征和生理生化特點，按照一定的流程進行。先根據(jù)菌落顏色進行分類。臨床為常見的是白色或奶白色菌落，這類菌進一步做芽管試驗，若芽管試驗是陽性則為白念珠菌，若陰性則通過Vitek YBC或API20C及玉米吐溫瓊脂上培養(yǎng)的形態(tài)特征來鑒定。另外，還可以應(yīng)用念珠菌顯色瓊脂、尿素酶試驗等試驗來輔助鑒定。

霉菌的鑒定非常復(fù)雜，有許多標準包括形態(tài)學特征、溫度耐受性，放線-菌酮抗性、雙相性、營養(yǎng)需求、蛋白分解活動以及水解尿素能力等。現(xiàn)代分類學鑒定方法主要依據(jù)分生孢子的個體發(fā)生過程結(jié)合其他特征來進行鑒定。初代培養(yǎng)后根據(jù)形態(tài)學特征一般可鑒定到屬的水平，再依據(jù)不同真菌的鑒定要求，采用標準培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進一步完成菌種鑒定。例如：曲霉屬鑒定時需要采用標準培養(yǎng)基，即察氏培養(yǎng)基和麥芽瓊脂，25℃培養(yǎng)7天后與曲霉形態(tài)鑒定檢索表對應(yīng)得到正確的結(jié)果。