影響質(zhì)粒提取的因素：
質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān)，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細胞的裂解、質(zhì)�？截悢�(shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。
宿主菌種類
質(zhì)粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，多數(shù)情況下我們是從大腸桿菌中提取質(zhì)粒。大腸桿菌的菌株不同會影響質(zhì)粒提取的質(zhì)量。從宿主菌如DH5α和*0中可以得到高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG1和JM系列會在裂解時產(chǎn)生大量的糖類，如果沒有完全去除，將抑制后續(xù)實驗中的酶活性，影響質(zhì)粒DNA提取的質(zhì)量。另外，有些菌株有非常高的內(nèi)切酶活性，會降低DNA的得率。因此推薦使用DH5α和*0來提取質(zhì)粒DNA。
培養(yǎng)時間
從固體培養(yǎng)基平板上挑取一個單菌落，接種到培養(yǎng)物中（含有相關(guān)抗生素的液體培養(yǎng)基中），振蕩培養(yǎng)12-16小時。不應(yīng)超過16小時，因為這時細胞開始裂解，使得質(zhì)粒的得率降低，也會導(dǎo)致質(zhì)粒丟失或質(zhì)粒變異。
質(zhì)粒擴增
氯霉素能抑制宿主細胞
蛋白質(zhì)和DNA的合成，但對松弛型質(zhì)粒的復(fù)制沒有影響。因此，在細菌培養(yǎng)液中加入氯霉素可提高松弛型質(zhì)粒的拷貝數(shù)。由于氯霉素抑制了宿主細胞蛋白質(zhì)和DNA的合成，從而抑制了染色體的復(fù)制，但質(zhì)粒復(fù)制所用的酶半衰期較長，故質(zhì)粒仍可繼續(xù)復(fù)制，這樣既可增加質(zhì)粒產(chǎn)量，又可降低細胞的數(shù)量，使細菌裂解液的粘度降低而便于操作。常用于擴增的氯霉素濃度為170ug/ml 。
抗生素
在菌株的各生長階段都應(yīng)加入抗生素篩選�，F(xiàn)在用的許多質(zhì)粒都不含有在細胞分裂時確保平均分配的par位點，無質(zhì)粒的子細胞在無抗生素時復(fù)制速度遠大于含質(zhì)粒的細胞。
客服一
