細(xì)胞復(fù)蘇，生物學(xué)的種術(shù)語，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)的過程。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞凍存的原理
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以大限度的保存細(xì)胞活力。目細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。
細(xì)胞復(fù)蘇的步驟
①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，細(xì)胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)提高細(xì)胞死亡率，復(fù)蘇過程中般細(xì)胞死亡率在20%～25%之間。
②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。
③小心開啟瓶蓋，把細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有4mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，26℃～28℃培養(yǎng)1h，讓細(xì)胞貼壁。
④細(xì)胞貼壁后，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細(xì)胞及其碎片，加5mL新鮮培養(yǎng)基，26℃～28℃培養(yǎng)。
⑤細(xì)胞培養(yǎng)24h后，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直到形成單層，便可以傳代。
⑥詳細(xì)記錄復(fù)蘇細(xì)胞的名稱、數(shù)量、復(fù)蘇時(shí)間、存放部位等。
細(xì)胞復(fù)蘇的注意事項(xiàng)
1、注意無菌操作。
2、應(yīng)在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)溫速度太慢，則會(huì)造成細(xì)胞損傷。另外，細(xì)胞復(fù)蘇后的操作好在4℃冰浴中進(jìn)行，以減少冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的毒性。
3、細(xì)胞復(fù)蘇過程中，升溫的速率要大，把從液氮或-70℃冰箱中取出的細(xì)胞在短的時(shí)間內(nèi)放入水浴鍋。
4、細(xì)胞放入水浴中注意用鑷子夾住細(xì)胞凍存管并在水浴中不時(shí)晃動(dòng)，使其受熱均勻，并防止水浴時(shí)水進(jìn)入細(xì)胞凍存管污染細(xì)胞。打開細(xì)胞凍存管之要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?br />
5、液氮操作有定的危險(xiǎn)性，打開液氮罐取出細(xì)胞時(shí)，戴上防護(hù)眼鏡。
6、如果凍存管密封不嚴(yán)，液氮可被吸入。由于解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，將可能發(fā)生爆炸。復(fù)蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。
客服一
