做
細(xì)胞生物學(xué)試驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是常見的一個(gè)試驗(yàn)。但是有很多人不是很得辦法,鋪得不是很均勻:要么中心密周圍稀,要么周圍密中心禿頂。怎么辦呢?
一般 96 孔板,每孔是加 100 微升細(xì)胞懸液,從孔的左面接近底部參加,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩下的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手悄悄扶住板的左面,右手悄悄敲擊板的右邊際,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞會(huì)集成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩下三個(gè)邊,靜置約 5 分鐘,放入 37 度培育箱。
6 孔板、12 孔板或 24 孔板,均可選用將個(gè)孔參加少數(shù)無血清培育基,晃動(dòng)滋潤(rùn)整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,相同辦法滋潤(rùn)孔底,其它孔一次類推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,加細(xì)胞懸液的時(shí)分能夠避免加在中心,中心細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后會(huì)呈現(xiàn)周邊細(xì)胞多中心少的現(xiàn)象,細(xì)胞渙散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。
細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培育板抬高,對(duì)著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之渙散。假如試驗(yàn)室有平板振蕩器的話,建議用這個(gè)
儀器稍振蕩一下,效果不錯(cuò),振幅小,頻率高。
細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,要充沛懸浮。還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,需求晃動(dòng),晃的時(shí)分不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中心去了,就會(huì)不均勻。
一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿后,正常處理,在培育瓶里吹勻,然后鋪 6 孔板,每孔 2 毫升,鋪完之后不必調(diào)查直接用酒精棉擦拭,然后放到培育箱里,輕微的左右前后各三圈;旧 24 小時(shí)之后再調(diào)查,每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻。
計(jì)算好所需求的悉數(shù)液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫 8 字型晃,顯微鏡下調(diào)查,假如不均勻,按上述辦法再晃。假如細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子。
放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個(gè)方向 5 到 6 次,但要害的是搖晃后直接放入培育箱中,不要再做過多的運(yùn)動(dòng),例如放到鏡下去看,不然很簡(jiǎn)單就又聚到中心去了。